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如何建立稳转细胞系
问题更新日期：2024-11-08 14:12:52
问题描述
如何建立稳转细胞系，麻烦给回复
- 精选答案
-
这一过程包括：目的基因的提取--表达载体的构建--目的基因的表达--蛋白检测①目的基因的提取，可以通过通用引物的扩增，或者知道序列直接合成，一般蛋白表达的话，建议合成顺便优化序列②载体构建：利用真核表达或原核表达，可以选择多种载体，合适的载体有助于蛋白表达成功③目的基因表达：这一步是最主要的，根据你表达的蛋白应用选择合适的表达系统，少量的蛋白生产可以使用真核瞬时转染表达or原核表达，，如果后续需要大量生产活性蛋白，则最好要进行
稳定细胞系建立
，利于后续的大规模生产④检测，无论是真核或是原核表达，均可用WB检测，原核也可用SDS PAGE
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